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新冠病毒標(biāo)本采集和檢測技術(shù)指南

（原文）

新冠病毒標(biāo)本采集和檢測技術(shù)指南為指導(dǎo)各級醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)和其他相關(guān)機(jī)構(gòu)規(guī)范開展新冠肺炎標(biāo)本采集與實驗室檢測工作，確保檢測質(zhì)量，提高檢測效率，特制定本指南。

（一）采集對象

新冠肺炎病例、可疑感染人員和其他需要進(jìn)行檢測的人員，以及可能被污染的環(huán)境或物品等。

（二）采樣人員基本要求

從事標(biāo)本采集的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)經(jīng)過生物安全和實驗室檢測技術(shù)培訓(xùn)，熟練掌握標(biāo)本采集方法和操作流程，考核合格后方可上崗。采樣時，應(yīng)做好標(biāo)本信息記錄，嚴(yán)格遵守操作流程，確保標(biāo)本質(zhì)量符合要求、標(biāo)本及相關(guān)信息可追溯。

（三）標(biāo)本采集基本要求

1.住院病例的標(biāo)本由所在醫(yī)院的醫(yī)護(hù)人員采集，密切接觸者標(biāo)本由當(dāng)?shù)刂付ǖ募部貦C(jī)構(gòu)、醫(yī)療機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)采集。采集標(biāo)本時，要根據(jù)不同采集對象設(shè)置不同的采樣區(qū)域，發(fā)熱患者前往發(fā)熱門診就診和采樣。

2.確診病例、無癥狀感染者、入境人員、密切接觸者和密接的密接在住院、隔離觀察或健康監(jiān)測期間應(yīng)“單采單檢”，即單獨采集個體的標(biāo)本，單管進(jìn)行核酸檢測，不得進(jìn)行混采混檢。

3.根據(jù)臨床及實驗室檢測工作的需要，可在住院、隔離期間多次采樣，可同時采集呼吸道、血液、便等多種標(biāo)本。采樣人員應(yīng)嚴(yán)格遵循采樣規(guī)范，保障所采集標(biāo)本質(zhì)量符合要求，同時應(yīng)詳細(xì)記錄受檢者信息，可利用條形碼掃描等信息化手段采集相關(guān)信息。

4.人群篩查應(yīng)根據(jù)核酸提取、檢測所用試劑的要求確定采樣管，用于病毒分離的標(biāo)本應(yīng)放置于不含有病毒滅活劑的采樣管。

5.物品和環(huán)境監(jiān)測應(yīng)根據(jù)監(jiān)測目的和防控需求，確定采樣物品、位置與數(shù)量，采樣時應(yīng)嚴(yán)格遵循采樣規(guī)范。

（四）采集標(biāo)本種類

每個病例必須采集呼吸道標(biāo)本（上呼吸道標(biāo)本或下呼吸道標(biāo)本），重癥病例優(yōu)先采集下呼吸道標(biāo)本；根據(jù)臨床需要可留取便標(biāo)本、全血標(biāo)本、血清標(biāo)本和尿標(biāo)本。物品和環(huán)境標(biāo)本根據(jù)監(jiān)測需求采集。標(biāo)本種類如下：

1.上呼吸道標(biāo)本

包括鼻咽拭子、口咽拭子等。

2.下呼吸道標(biāo)本

深咳痰液、肺泡灌洗液、支氣管灌洗液、呼吸道吸取物等。

3.便標(biāo)本/肛拭子

留取糞便標(biāo)本約10克（花生大?。绻槐阌诹羧”銟?biāo)本，可采集肛拭子。

4.血液標(biāo)本

抗凝血，采集量5ml，建議使用含有EDTA抗凝劑的真空釆血管采集血液。

5.血清標(biāo)本

盡量采集急性期、恢復(fù)期雙份血清。血清應(yīng)當(dāng)盡早（最好在發(fā)病后7天內(nèi)）采集，第二份血清應(yīng)當(dāng)在發(fā)病后第3～4周采集。采集量5ml，建議使用無抗凝劑的真空采血管。血清標(biāo)本主要用于抗體的測定，不進(jìn)行核酸檢測。

6.尿標(biāo)本

留取中段晨尿，采集量2～3ml。

7.物體表面標(biāo)本

包括進(jìn)口冷鏈?zhǔn)称坊蜻M(jìn)口貨物的內(nèi)外包裝表面，以及運(yùn)輸儲藏工具等可能被污染的部位進(jìn)行涂抹采集的標(biāo)本。

8.污水標(biāo)本

根據(jù)海運(yùn)口岸大型進(jìn)口冷凍物品加工處理場所排水系統(tǒng)分布情況，重點選取污水排水口、內(nèi)部管網(wǎng)匯集處、污水井、污水流向的下游或與市政管網(wǎng)的連接處等關(guān)鍵位置對未經(jīng)消殺處理的污水進(jìn)行采樣。

9.其它

已有唾液等標(biāo)本用于新冠病毒檢測的報告。

（五）標(biāo)本采集和處理

1.鼻咽拭子

采樣人員一手輕扶被采集人員的頭部，一手執(zhí)拭子，拭子貼鼻孔進(jìn)入，沿下鼻道的底部向后緩緩深入，由于鼻道呈弧形，不可用力過猛，以免發(fā)生外傷出血。待拭子頂端到達(dá)鼻咽腔后壁時，輕輕旋轉(zhuǎn)一周（如遇反射性咳嗽，應(yīng)停留片刻），然后緩緩取出拭子，將拭子頭浸入含2～3ml病毒保存液（也可使用等滲鹽溶液、組織培養(yǎng)液或磷酸鹽緩沖液）的管中，尾部棄去，旋緊管蓋。

2.口咽拭子

被采集人員頭部微仰，嘴張大，露出兩側(cè)扁桃體，采樣人員將拭子越過舌根，在被采集者兩側(cè)扁桃體稍微用力來回擦拭至少3次，然后再在咽后壁上下擦拭至少3次，將拭子頭浸入含2～3ml病毒保存液（也可使用等滲鹽溶液、組織培養(yǎng)液或磷酸鹽緩沖液）的管中，尾部棄去，旋緊管蓋?？谘适米右部膳c鼻咽拭子放置于同一管中。

3.鼻咽抽取物或呼吸道抽取物

用與負(fù)壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液或從氣管抽取呼吸道分泌物。將收集器頭部插入鼻腔或氣管，接通負(fù)壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出，收集抽取的粘液，并用3ml采樣液沖洗收集器一次（亦可用小兒導(dǎo)尿管接在50ml注射器上來替代收集器）。

4.深咳痰液

要求病人深咳后，將咳出的痰液收集于含3ml采樣液的采樣管中。如果痰液未收集于采樣液中，可在檢測前加入2～3ml采樣液，或加入痰液等體積的痰液消化液。痰液消化液儲存液配方見表1。使用時將儲存液用去離子水稀釋至50ml，與痰液等體積混合使用，或者參照試劑說明進(jìn)行使用，也可采用痰液等體積的含1g/L蛋白酶K的磷酸鹽緩沖液將痰液化。

5.支氣管灌洗液

將收集器頭部從鼻孔或氣管插口處插入氣管（約30cm 深處），注入5ml生理鹽水，接通負(fù)壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出，收集抽取的粘液，并用采樣液沖洗收集器一次，也可用小兒導(dǎo)尿管接在50ml注射器上來替代收集。

6.肺泡灌洗液

局部麻醉后將纖維支氣管鏡通過口或鼻經(jīng)過咽部插入右肺中葉或左肺舌段的支氣管，將其頂端契入支氣管分支開口，經(jīng)氣管活檢孔緩緩加入滅菌生理鹽水，每次30～50ml，總量100～250ml，不應(yīng)超過300ml。

7.糞便標(biāo)本

取1ml標(biāo)本處理液，挑取黃豆粒大小的糞便標(biāo)本加至管中，輕輕吹吸3～5次，室溫靜置10分鐘，以8000rpm離心5分鐘，吸取上清液進(jìn)行檢測。糞便標(biāo)本處理液可自行配制，配方見表 2。也可使用HANK’S液或其它等滲鹽溶液、組織培養(yǎng)液或磷酸鹽緩沖液溶解便標(biāo)本制備便懸液。如患者出現(xiàn)腹瀉癥狀，則留取糞便標(biāo)本3～5ml，輕輕吹打混勻后，以8000rpm離心5分鐘，吸取上清液備用。

8.肛拭子

用消毒棉拭子輕輕插入肛門3～5cm，再輕輕旋轉(zhuǎn)拔出，立即放入含有3～5ml病毒保存液的15ml外螺旋蓋采樣管中，棄去尾部，旋緊管蓋。

9.血液標(biāo)本

建議使用含有EDTA抗凝劑的真空采血管采集血液標(biāo)本5ml，根據(jù)所選用核酸提取試劑的類型確定以全血或血漿進(jìn)行核酸提取。如需分離血漿，將全血1500～2000rpm離心10分鐘，收集上清液于無菌螺口塑料管中。

10.血清標(biāo)本

用真空負(fù)壓采血管采集血液標(biāo)本5ml，室溫靜置30分鐘，1500～2000rpm離心10分鐘，收集血清于無菌螺口塑料管中。

11.物體表面標(biāo)本

參考《農(nóng)貿(mào)（集貿(mào)）市場新型冠狀病毒環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范》（WS/T776—2021）推薦的方法，采樣拭子充分浸潤病毒保存液后在表面重復(fù)涂抹，將拭子放回采樣管浸潤，取出后再次涂抹采樣，重復(fù)3次以上。對表面較大的物體進(jìn)行多點分布式采樣。

12.污水標(biāo)本

采集污水的水體標(biāo)本時，參考《污水中新型冠狀病毒富集濃縮和核酸檢測方法標(biāo)準(zhǔn)》（WS/T 799-2022），用無菌聚乙烯瓶采集污水樣本，采樣體積為300ml?？筛鶕?jù)現(xiàn)場條件和檢測需求確定水樣采集方式，如瞬時水樣（采樣點位某一時間隨機(jī)采集的樣本）或混合水樣（同一采樣點位不同時間所采集的瞬時水樣混合后的樣本）；如農(nóng)貿(mào)（集貿(mào)）市場內(nèi)排水溝內(nèi)無法采集足夠體積水樣，可采集污水的拭子標(biāo)本，參考《農(nóng)貿(mào)（集貿(mào)）市場新型冠狀病毒環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范》（WS/T776-2021）推薦的方法，用拭子浸入吸附污水，將拭子放回采樣管浸潤，取出后再次浸入污水，重復(fù)3次以上，對每個污水采樣位置應(yīng)進(jìn)行多點分布式采樣。

13.其他材料

如唾液等標(biāo)本，依據(jù)檢測需求采集。

（六）標(biāo)本包裝

標(biāo)本采集后應(yīng)在生物安全二級實驗室生物安全柜內(nèi)分裝。

1.所有標(biāo)本應(yīng)當(dāng)放在大小適合的帶螺旋蓋內(nèi)有墊圈、耐冷凍的標(biāo)本采集管里，擰緊。容器外注明標(biāo)本編號、種類、姓名及采樣日期。

2.將密閉后的標(biāo)本裝入密封袋，每袋限一份標(biāo)本。標(biāo)本包裝要求要符合《危險品航空安全運(yùn)輸技術(shù)細(xì)則》相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)。

3.涉及外部標(biāo)本運(yùn)輸?shù)?，?yīng)根據(jù)標(biāo)本類型，按照A類或B類感染性物質(zhì)進(jìn)行三層包裝。

 （七）標(biāo)本保存

用于病毒分離和核酸檢測的標(biāo)本應(yīng)當(dāng)盡快進(jìn)行檢測，可在24小時內(nèi)檢測的標(biāo)本置于4℃（2℃～8℃）保存；24小時內(nèi)無法檢測的標(biāo)本應(yīng)置于-70℃或以下保存（如無-70℃保存條件，則于-20℃冰箱暫存）。血清標(biāo)本可在4℃存放3天，-20℃以下可長期保存。境外高風(fēng)險區(qū)域人群以及新冠肺炎患者的密切接觸者等人員的核酸檢測標(biāo)本，檢測后，應(yīng)當(dāng)在-20℃保存7天。其他一般人群篩查標(biāo)本，則可在4℃保存24小時。應(yīng)當(dāng)設(shè)立專庫或?qū)９駟为毐４鏄?biāo)本。

（八）標(biāo)本送檢

標(biāo)本采集后應(yīng)當(dāng)盡快送往實驗室，標(biāo)本采集后室溫（25℃）放置不宜超過4小時。如果需要長途運(yùn)輸，應(yīng)采用干冰保藏，難以獲取干冰時，可使用冰袋、冰排等低溫

運(yùn)輸。

1.送檢標(biāo)本

各省（自治區(qū)、直轄市）發(fā)現(xiàn)的本土疫情中的首發(fā)或早期病例、與早期病例有流行病學(xué)關(guān)聯(lián)的關(guān)鍵病例、感染來源不明的本土病例、境外輸入病例、入境物品及相關(guān)環(huán)境陽性標(biāo)本等所有原始標(biāo)本應(yīng)平行采集至少2份，一份送各省級疾控機(jī)構(gòu)進(jìn)行檢測，另一份送中國疾控中心病毒病所進(jìn)行檢測、復(fù)核，同時附標(biāo)本送檢單（見附件12-1）。各省分離到的新的代表性毒株，應(yīng)及時送中國疾控中心病毒病所復(fù)核、保藏。

2.標(biāo)本及毒株運(yùn)輸

（1）國內(nèi)運(yùn)輸

新冠病毒毒株或其它潛在感染性生物材料分類屬于A類，對應(yīng)的聯(lián)合國編號為UN2814，包裝符合國際民航組織文件Doc9284《危險物品安全航空運(yùn)輸技術(shù)細(xì)則》的PI620分類包裝要求；環(huán)境標(biāo)本屬于B類，對應(yīng)的聯(lián)合國編號為UN3373，包裝符合國際民航組織文件Doc9284《危險物品安全航空運(yùn)輸技術(shù)細(xì)則》的PI650分類包裝要求；通過其他交通工具運(yùn)輸?shù)目蓞⒄找陨蠘?biāo)準(zhǔn)包裝。新冠病毒毒株或其它潛在感染性材料運(yùn)輸應(yīng)按照《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或標(biāo)本運(yùn)輸管理規(guī)定》（原衛(wèi)生部令第45 號）辦理《準(zhǔn)運(yùn)證書》。

（2）國際運(yùn)輸

在國際間運(yùn)輸?shù)男鹿诓《緲?biāo)本或毒株，應(yīng)當(dāng)規(guī)范包裝，按照《出入境特殊物品衛(wèi)生檢疫管理規(guī)定》辦理相關(guān)手續(xù)，并滿足相關(guān)國家和國際相關(guān)要求。

（3）標(biāo)本和毒株的接收及管理

通過航空進(jìn)行運(yùn)送的標(biāo)本抵達(dá)目的地機(jī)場后，由專業(yè)運(yùn)輸車輛運(yùn)送至接收單位，通過陸路運(yùn)輸?shù)臉?biāo)本由專業(yè)車輛進(jìn)行運(yùn)送，運(yùn)送人員和接收人員應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行雙簽收。新冠病毒標(biāo)本及毒株應(yīng)由專人管理，準(zhǔn)確記錄標(biāo)本及毒株的來源、種類、數(shù)量，編號登記，采取有效措施確保毒株和標(biāo)本的安全，嚴(yán)防發(fā)生誤用、惡意使用、被盜、被搶、丟失、泄露等事件。

（一）檢測人員要求

實驗室檢測人員應(yīng)當(dāng)具有實驗室工作經(jīng)歷以及相關(guān)專業(yè)技術(shù)技能，接受過新冠病毒相關(guān)檢驗檢測技能培訓(xùn)。檢測機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)按照所開展檢測項目及標(biāo)本量配備實驗室檢測人員，以保證及時、高效完成檢測和結(jié)果報告。

（二）實驗室檢測

1.實時熒光RT-PCR方法檢測新冠病毒核酸

（1）核酸檢測實驗室

新冠核酸檢測實驗室按功能區(qū)布置位置的不同，可分為集中布置形式和分散布置形式。開展新冠病毒核酸檢測的實驗室應(yīng)當(dāng)設(shè)置以下區(qū)域：試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)。根據(jù)使用儀器的功能，區(qū)域可適當(dāng)合并。如采用標(biāo)本加樣、核酸提取及擴(kuò)增檢測為一體的自動化分析儀，標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)可合并。集中布置形式的實驗室設(shè)置應(yīng)遵循“各區(qū)獨立，單向流動（注意風(fēng)向，壓力梯度走向），因地制宜，方便工作”的原則。各區(qū)的功能如下：

①試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)

用于分裝、儲存試劑、制備擴(kuò)增反應(yīng)混合液，以及儲存和準(zhǔn)備實驗耗材。該區(qū)應(yīng)配備冰箱或冰柜、離心機(jī)、試驗臺、渦旋振蕩器、微量加樣器等。為防止污染，該區(qū)宜保持正壓狀態(tài)。

②標(biāo)本制備區(qū)

標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)桶的開啟、標(biāo)本滅活（必要時）、核酸提取及模板加入至擴(kuò)增反應(yīng)管等。該區(qū)應(yīng)配備冰箱或冰柜、生物安全柜、離心機(jī)、試驗臺、微量加樣器，可根據(jù)實際工作需要選配自動化核酸提取儀等。標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)桶的開啟、分裝應(yīng)在生物安全柜內(nèi)完成。為防止污染，該區(qū)宜保持負(fù)壓狀態(tài)。為操作方便，標(biāo)本的分裝以及核酸提取也可以在獨立的生物安全二級（BSL-2）實驗室進(jìn)行，提取的核酸可以轉(zhuǎn)運(yùn)至該區(qū)加至擴(kuò)增反應(yīng)液中。

③核酸擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)

進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)和產(chǎn)物分析。該區(qū)應(yīng)配備實時熒光定量PCR儀。為防止擴(kuò)增產(chǎn)物污染環(huán)境，該區(qū)宜保持負(fù)壓狀態(tài)，壓力等于或低于標(biāo)本制備區(qū)。 

（2）新冠病毒核酸的熒光定量RT-PCR檢測

實驗室應(yīng)當(dāng)制定標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），并嚴(yán)格按照SOP進(jìn)行操作。接到標(biāo)本后，應(yīng)當(dāng)在生物安全柜內(nèi)對標(biāo)本進(jìn)行清點核對，并依據(jù)SOP進(jìn)行試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本前處理、核酸提取、核酸擴(kuò)增、結(jié)果分析及報告。實驗室應(yīng)當(dāng)建立可疑標(biāo)本復(fù)檢的流程。

①試劑準(zhǔn)備

應(yīng)當(dāng)選擇國家藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)的試劑，建議根據(jù)核酸提取試劑及擴(kuò)增體系的要求選擇配套的標(biāo)本采樣管，不建議免提取核酸直接進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)。

②標(biāo)本處理

使用含胍鹽等滅活型采樣液的標(biāo)本無需進(jìn)行滅活處理，可直接進(jìn)行核酸提取，而使用非滅活型采樣液的標(biāo)本，按照核酸提取試劑盒的說明，取適量標(biāo)本加至核酸提取裂解液中充分混勻作用一定的時間則可以有效滅活病毒。選用熱滅活時可采用95℃加熱15分鐘，不推薦采用56℃孵育30分鐘的處理方式滅活病毒，該條件不能保障充分滅活病毒。污水水樣標(biāo)本處理可參考《污水中新型冠狀病毒富集濃縮和核酸檢測方法標(biāo)準(zhǔn)》（WS/T 799-2022）推薦的方法；污水拭子標(biāo)本處理可參考《農(nóng)貿(mào)（集貿(mào)）市場新型冠狀病毒環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范》（WS/T776-2021）推薦的方法。

③核酸提取

將滅活后的標(biāo)本取出，在生物安全柜內(nèi)打開標(biāo)本采集管加樣，或按照核酸提取試劑盒的說明，將標(biāo)本與裂解液作用足夠時間后繼續(xù)核酸提取步驟，核酸提取完成后立即封蓋。取適量核酸加至PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中。

④核酸擴(kuò)增

將擴(kuò)增體系放入熒光定量PCR儀，按照試劑盒說明書設(shè)置擴(kuò)增程序，啟動擴(kuò)增程序。擴(kuò)增完成后反應(yīng)管不可開蓋，直接放于垃圾袋中，封好袋口，不可高壓，按一般醫(yī)療廢物轉(zhuǎn)移出實驗室處理。檢測機(jī)構(gòu)所選用的新冠病毒核酸檢測試劑應(yīng)針對新冠病毒基因組中開放讀碼框1ab（open reading frame 1ab，ORF1ab）和核衣殼蛋白（nucleocapsid protein，N）基因，人體標(biāo)本檢測原則上選擇含內(nèi)源性內(nèi)參的核酸檢測試劑。

⑤陽性標(biāo)本的確認(rèn)

實驗室確認(rèn)陽性病例需滿足以下兩個條件中的一個：條件一：同一份標(biāo)本中新冠病毒2個靶標(biāo)（ORF1ab、N）實時熒光RT-PCR檢測結(jié)果均為陽性。如果出現(xiàn)單個靶標(biāo)陽性的檢測結(jié)果，則需要重新檢測或重新采樣復(fù)核。條件二：兩種標(biāo)本實時熒光RT-PCR同時出現(xiàn)單靶標(biāo)陽性，或同種類型標(biāo)本兩次采樣檢測中均出現(xiàn)單個靶標(biāo)陽性的檢測結(jié)果，可判定為陽性。環(huán)境與生物材料核酸檢測陽性要排除疫苗接種物殘留污染的影響。核酸檢測結(jié)果假陰性的可能原因包括：標(biāo)本質(zhì)量差；標(biāo)本采集時間過早或過晚；標(biāo)本保存、運(yùn)輸和處理不當(dāng)；其他原因如病毒變異、PCR抑制等。

⑥質(zhì)控

由上級疾控部門對下級疾控實驗室進(jìn)行核酸檢測質(zhì)控考核，中國疾控中心每年至少開展一次對省級疾控機(jī)構(gòu)實驗室的質(zhì)控考核，并同時提供全國新冠病毒實驗室檢測質(zhì)控方案，省級針對地市級實驗室的質(zhì)控考核每年不少于兩次。各檢測機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)核酸檢測質(zhì)量控制，選用擴(kuò)增檢測試劑盒指定的核酸提取試劑和擴(kuò)增儀。

性能驗證。臨床標(biāo)本檢測前，實驗室應(yīng)對核酸提取試劑、提取儀、擴(kuò)增試劑、擴(kuò)增儀等組成的檢測系統(tǒng)進(jìn)行必要的性能驗證，性能指標(biāo)包括但不限于精密度（至少要有重復(fù)性）和最低檢測限。

室內(nèi)質(zhì)控。實驗室可按照《國家衛(wèi)生健康委辦公廳關(guān)于醫(yī)療機(jī)構(gòu)開展新型冠狀病毒核酸檢測有關(guān)要求的通知》（國衛(wèi)辦醫(yī)函〔2020〕53號）要求規(guī)范開展室內(nèi)質(zhì)控。每批檢測至少有1份弱陽性質(zhì)控品（第三方質(zhì)控品，通常為檢出限的1.5-3倍）、3份陰性質(zhì)控品（生理鹽水）。質(zhì)控品隨機(jī)放在臨床標(biāo)本中，參與從提取到擴(kuò)增的全過程。大規(guī)模人群篩查時，一旦出現(xiàn)陽性結(jié)果，應(yīng)對陽性標(biāo)本采用另外一到兩種更為靈敏的核酸檢測試劑對原始標(biāo)本進(jìn)行復(fù)核檢測，復(fù)核陽性方可報出。

物品和環(huán)境標(biāo)本的采集檢測，還需在采樣前及采樣過程中至少設(shè)一個現(xiàn)場空白標(biāo)本及一個運(yùn)輸空白標(biāo)本，以進(jìn)行過程中的質(zhì)量控制。

室間質(zhì)評。實驗室應(yīng)常態(tài)化參加國家級或省級疾控機(jī)構(gòu)組織的室間質(zhì)評。對檢測量大以及承擔(dān)重點人群篩查等任務(wù)的實驗室，可適當(dāng)增加室間質(zhì)評頻率。不按要求參加室間質(zhì)評的，或室間質(zhì)評結(jié)果不合格的，應(yīng)通報批評并上報國家衛(wèi)健委，待室間質(zhì)評通過后方可開展核酸檢測。

核酸檢測實驗室質(zhì)控詳細(xì)內(nèi)容參見《國家衛(wèi)生健康委辦公廳關(guān)于加強(qiáng)疾控機(jī)構(gòu)新冠病毒核酸檢測實驗室質(zhì)量控制的通知》（國衛(wèi)辦疾控函〔2021〕548號）《疾控機(jī)構(gòu)新冠病毒核酸檢測質(zhì)量控制方案》。

2.病毒全基因組測序

病毒全基因組測序可以監(jiān)測病毒基因組突變，為新冠病毒核酸檢測試劑、疫苗研發(fā)策略的改變提供實驗數(shù)據(jù)，同時也為流調(diào)溯源工作提供支持。

（1）測序標(biāo)本選取原則

結(jié)合流調(diào)信息和病例傳播鏈關(guān)系，優(yōu)先選擇以下標(biāo)本開展測序：核酸檢測Ct值≤32 的本土疫情中的首發(fā)或早期病例、與早期病例有流行病學(xué)關(guān)聯(lián)的關(guān)鍵病例、感染來源不明的本土病例、境外輸入病例、入境物品及相關(guān)環(huán)境陽性標(biāo)本、疫苗接種后核酸檢測陽性者標(biāo)本等。測序結(jié)果應(yīng)與本地近一個月的輸入病例和本土病例序列進(jìn)行比對。對同一傳播鏈或流行病學(xué)關(guān)系明確的病例無需全部測序。 

（2）測序要求

①測序單位和流程

以省、自治區(qū)、直轄市為單位確定開展新冠病毒全基因組測序的機(jī)構(gòu)，包括省級疾控機(jī)構(gòu)和科研機(jī)構(gòu)；具備測序條件的省份要在接收標(biāo)本后24小時內(nèi)開展測序工作。不具備測序條件的省份要及時將標(biāo)本送至病毒病所，病毒病所收到標(biāo)本后及時啟動序列測定工作。

②結(jié)果報告與反饋

各省份要建立本省輸入、本土病例新冠病毒基因組數(shù)據(jù)庫，及時進(jìn)行序列比對分析，逐步提高自主分析能力。獲得的全部測序數(shù)據(jù)都必須上報中國疾控中心病毒病所用于我國新冠病毒溯源數(shù)據(jù)庫的更新與維護(hù)。對本土疫情的指示或首發(fā)病例、本土疫情中由不同基因型的毒株導(dǎo)致的新傳播鏈的指示或首發(fā)病例，測序完成后應(yīng)于24小時內(nèi)將數(shù)據(jù)報送病毒病所，病毒病所確認(rèn)數(shù)據(jù)完整無誤后于48小時之內(nèi)反饋結(jié)果；對本土疫情中歸屬已知傳播鏈的病例、境外輸入病例、環(huán)境標(biāo)本（非指示或首發(fā)病例相關(guān)），測序數(shù)據(jù)于每周周一上午集中上報，病毒病所確認(rèn)數(shù)據(jù)完整無誤后于一周之內(nèi)反饋結(jié)果。

3.血清抗體檢測

血清抗體檢測用作新冠病毒核酸檢測的補(bǔ)充檢測，也用于評估疫苗接種后誘發(fā)的免疫反應(yīng)。應(yīng)采用中國藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的試劑進(jìn)行檢測，采集急性期（發(fā)病7天內(nèi)）和恢復(fù)期（3-4周后）雙份血清進(jìn)行檢測，也可根據(jù)臨床需要確定采集時間，疑似新冠病毒感染者抗體檢測陽性時應(yīng)排除新冠疫苗接種因素的影響。

4.病毒分離培養(yǎng)

（1）病毒分離培養(yǎng)對象

對核酸檢測Ct值≤30的所有境外輸入病例的標(biāo)本、本土疫情中的首發(fā)或早期病例、與早期病例有流行病學(xué)關(guān)聯(lián)的關(guān)鍵病例、感染來源不明的本土病例以及疫苗接種后核酸陽性者標(biāo)本開展病毒分離培養(yǎng)。

 （2）毒株報送與結(jié)果反饋

具有新冠病毒分離、培養(yǎng)資質(zhì)的省級疾控機(jī)構(gòu)應(yīng)開展病毒分離培養(yǎng)工作，收到關(guān)鍵標(biāo)本后96小時內(nèi)開展相關(guān)工作，在獲得分離毒株后96小時內(nèi)將毒株送病毒病所保存?zhèn)浒福⒍局晷蛄械认嚓P(guān)信息報送病毒病所。不具備病毒分離條件的省份，要在病例報告后48小時內(nèi)啟動送樣流程，將標(biāo)本送達(dá)病毒病所，病毒病所收到標(biāo)本后應(yīng)在96小時內(nèi)啟動病毒分離工作，獲得毒株后96小時內(nèi)反饋分析結(jié)果。

5.抗原檢測

不具備開展核酸檢測條件的基層醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)、隔離觀察人員和有抗原自我檢測需求的社區(qū)居民可以進(jìn)行抗原檢測。抗原檢測不作為確診病例或無癥狀感染者診斷的依據(jù)，僅用作核酸檢測方法的補(bǔ)充，實現(xiàn)“快篩快檢”，提高感染者發(fā)現(xiàn)的及時性。具體實施流程及要求參照《新冠病毒抗原檢測應(yīng)用方案（試行）》（聯(lián)防聯(lián)控機(jī)制綜發(fā)﹝2022﹞21號）執(zhí)行。

根據(jù)新冠病毒傳播特性、致病性和臨床資料等信息，該病毒按照第二類病原微生物進(jìn)行管理，具體要求如下：

（一）實驗活動規(guī)范

新冠病毒培養(yǎng)、動物感染實驗應(yīng)當(dāng)在生物安全三級及以上實驗室開展；未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料的操作應(yīng)當(dāng)在生物安全二級及以上實驗室進(jìn)行，同時采用不低于生物安全三級實驗室的個人防護(hù)；滅活材料的操作應(yīng)當(dāng)在生物安全二級及以上實驗室進(jìn)行；不涉及感染性材料的操作，可以在生物安全一級實驗室進(jìn)行。

（二）相關(guān)標(biāo)本處置

各省級衛(wèi)生健康行政部門要根據(jù)疫情防控需要和實驗室生物安全有關(guān)要求，及時研判提出新冠病毒實驗室檢測生物標(biāo)本處置意見。對確需保存的，應(yīng)當(dāng)盡快指定具備保存條件的機(jī)構(gòu)按照相對集中原則進(jìn)行保存，或送至國家級菌（毒）種保藏中心保藏；對無需保存的，由相關(guān)機(jī)構(gòu)按照生物安全有關(guān)要求及時處理。

（三）實驗室廢棄物處理及實驗室污染的處理

參考《醫(yī)療機(jī)構(gòu)新型冠狀病毒核酸檢測工作手冊》（試行第二版）。

附件：