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本文主要闡述樣本性狀、檢測方法、樣本周轉(zhuǎn)時間（TAT）及各類藥物對生化檢測結(jié)果的影響。臨床實驗室工作人員應高度關注此類問題，注重患者狀態(tài)和臨床溝通，不斷提高檢驗結(jié)果的準確性。 臨床生化檢驗在臨床疾病的診治中發(fā)揮了重要作用，在患者疾病診斷、治療指導及療效評價等環(huán)節(jié)均有重要的臨床價值。因此，生化檢驗結(jié)果的準確性對臨床醫(yī)生和患者均十分重要。有研究結(jié)果顯示，在臨床反饋不滿意的檢驗結(jié)果中，有70%～80%的報告最終可溯源到樣本質(zhì)量不符合要求，而通常引起樣本質(zhì)量不符合要求的原因通常發(fā)生在檢驗前的樣本采集階段或送檢階段。 檢驗樣本TAT包括分析前TAT（樣本采集到樣本接收時間）和實驗室內(nèi)TAT（實驗室樣本接收到報告發(fā)送時間）。實驗室質(zhì)量管理除檢驗數(shù)據(jù)真實可靠性管理外，對影響檢驗結(jié)果的各種因素的管理也是必不可少的。TAT的及時性是影響檢驗質(zhì)量的重要因素。 導致TAT延長的因素是多方面的，樣本采集、樣本運送、樣本處理等任意一個環(huán)節(jié)的錯誤操作或低效率都將導致TAT的延長。加強與醫(yī)院有關部門的溝通，對樣本收集人員進行培訓、調(diào)整工作時間、優(yōu)化工作流程可有效縮短TAT，減少因TAT延長帶來的誤差。 1.對血乳酸和血氨的影響 隨著血液放置時間的延長，血液離體后，尤其在室溫條件下，紅細胞會繼續(xù)進行無氧酵解，產(chǎn)生大量的乳酸；有些實驗室會使用氟化物/草酸鹽抗凝劑來抑制糖酵解，短時間內(nèi)維持乳酸濃度的穩(wěn)定，但隨著放置時間的延長，抑制作用減弱，乳酸濃度也會逐步升高。 氨離子會因紅細胞內(nèi)的氨離子濃度是血漿中的2.8倍，如樣本放置時間過長，氨離子會因紅細胞的代謝或破碎而釋放入血，導致血漿中的氨離子濃度升高；血漿中含有的谷氨酰胺和多肽也易水解釋放出氨離子，導致血漿氨離子濃度升高。 因此，用于乳酸和血氨檢測的樣本不宜放置過長時間，應盡快上機檢測，以避免因糖酵解和紅細胞破碎導致的乳酸及血氨升高。 2.對血糖的影響 血糖檢測時樣本放置時間過長會明顯降低血糖的水平。真性紅細胞增多癥患者由于過量的WBC導致樣本中糖分解速率加快導致血糖降低。同時存在血清樣本血糖結(jié)果穩(wěn)定，而全血樣本隨著放置時間的延長，血糖結(jié)果迅速降低的現(xiàn)象。 對于一般人群而言，血糖檢測的室內(nèi)變異系數(shù)<2.6%，樣本分析前因素，包括抗凝管的選擇、樣本采集后的轉(zhuǎn)運時間及樣本放置的溫度等，對血糖結(jié)果影響較大。樣本放置時間過久（>4 h）及患者紅/白細胞增多是造成血糖假性降低的主要因素。室溫下血細胞會以0.4 mmol/L的速度降低血糖含量，進而干擾檢測結(jié)果。血液采集后1 h內(nèi)分離血清，可以有效延緩血糖降解 常規(guī)生化檢測是運用化學法、酶法、比濁法及電極法等方法檢測人體血、尿中各種蛋白質(zhì)、酶及代謝產(chǎn)物等物質(zhì)的水平，并結(jié)合患者的相關臨床癥狀，為疾病的診斷、治療、預后提供相關的診斷依據(jù)。樣本性狀的不同會對檢測方法造成干擾，從而影響檢測結(jié)果。 1.溶血對生化檢測結(jié)果的影響 溶血對各類生化檢驗項目的干擾機制，包括由于RBC內(nèi)高濃度成分逸出，增加血漿分析物濃度；血紅蛋白（Hb）濃度升高導致的光學干擾，還可以使431～555 nm波長附近的吸光度（A）值明顯上升，與試劑成分發(fā)生化學反應等。溶血對免疫透射比濁法的干擾主要來自Hb本身A值的干擾。 研究顯示，溶血樣本的IgM、前白蛋白和類風濕因子（RF）的結(jié)果均低于對照樣本（P<0.05）；當Hb為9.9、29.8 μmol/L時對免疫散射比濁法有明顯干擾，而免疫透射比濁法均無明顯干擾；溶血對酶法測定肌酐有明顯的負干擾，且干擾作用隨著溶血程度的加重而增大，這可能與Hb具有過氧化氫酶活性，Hb增加會消耗反應中更多的過氧化氫有關；5 g/L Hb對肌酐檢測的干擾誤差為-14.05%；溶血使Hb 濃度為4.0～7.5 g/L時，對血清尿酸檢測產(chǎn)生負干擾，導致檢測結(jié)果顯著偏低，平均偏差可達-10%。溶血對尿素和Cys C檢測無顯著影響。 2.黃疸對于生化檢測結(jié)果的影響 樣本中膽紅素通過本底干擾、光譜干擾和程序干擾3種方式干擾檢測。當結(jié)合膽紅素（CBil）達到342 μmol/L時，對肌酐檢測產(chǎn)生輕度負干擾（-5.69%）。非結(jié)合膽紅素（UBil）、CBil和δ膽紅素（δ-Bil）對尿酸檢測均有不同程度的干擾，干擾程度依次為CBil>UBil>δ- Bil。CBil干擾較大的原因可能是UBil與葡萄糖醛酸結(jié)合形成CBil之后，分子內(nèi)氫鍵被破壞，分子構象發(fā)生變化，一些極性基團暴露，使其還原能力增強，故產(chǎn)生的負干擾較大。 膽紅素對免疫透射比濁法和免疫散射比濁法檢測尿白蛋白均呈明顯正干擾，當尿膽紅素為16.85 μmol/L（相當于“1+”）時，對免疫透射比濁法的干擾率為22.94%，對免疫散射比濁法的干擾率為15.11%。膽紅素可干擾兔抗人單抗，但對鼠抗人單抗無影響。 3.脂血對于生化檢測結(jié)果的影響 發(fā)生脂濁的血清樣本中含有大量的乳糜微粒和極低密度脂蛋白，其對檢測結(jié)果的干擾主要是由于乳糜微粒具有光散射的特性，會產(chǎn)生濁度，從而影響反應的A值或使產(chǎn)物的顏色發(fā)生變化。分光光度比色法、免疫透射比濁法、免疫散射比濁法均會受脂濁的影響，且受干擾的程度與濁度相關。三酰甘油（TG）對尿素測定產(chǎn)生正干擾，導致檢測結(jié)果被高估；對肌酐和尿酸測定產(chǎn)生負干擾，造成檢測結(jié)果被低估；且TG濃度越高，干擾程度越顯著。通過超高速離心，吸取下層血清檢測尿素、肌酐和尿酸，可降低TG的干擾。高濃度TG不會對免疫比濁法檢測Cys C產(chǎn)生明顯影響。 針對溶血、黃疸和脂血的干擾，各臨床實驗室應因地制宜，選擇可行的方案來糾正干擾。對于溶血，實驗室可通過設置適當?shù)母辈ㄩL或采用Hb 單克隆抗體處理樣本，以減少干擾。對于黃疸引起的干擾，臨床實驗室?？赏ㄟ^設置合適的副波長，或?qū)颖具M行預稀釋來減少黃疸對檢測結(jié)果的干擾。高速離心法、血清稀釋法、0.9%氯化鈉溶液稀釋法均可去除乳糜，其中高速離心法去除乳糜的效果最好。 除了常見的溶血、脂血、黃疸等因素外，RF 等自身抗體、M 蛋白、嗜異性抗體等均會對不同檢測方法產(chǎn)生干擾，這些干擾因素可導致待測物的結(jié)果出現(xiàn)假性升高或降低。 隨著檢驗醫(yī)學技術的發(fā)展，越來越多的生化項目采用基于抗原抗體反應的免疫比濁法檢測，內(nèi)源性干擾對免疫檢測的干擾常被忽視和低估，尤其是在使用全自動生化分析儀或免疫分析儀進行大批量檢測時，很難被識別，往往在臨床醫(yī)生反饋檢測結(jié)果與臨床表現(xiàn)不符時才會被發(fā)現(xiàn)。 1.RF對生化檢測結(jié)果的影響 RF 是目前最常報道的干擾免疫透射比濁法的內(nèi)源性干擾物質(zhì)。RF 對免疫透射比濁法的干擾機制主要為RF與試劑2中包被抗體的膠乳顆粒發(fā)生非特異聚集反應，造成反應體系的濁度增加。研究顯示，RF對血清CRP 檢測有正干擾；患者樣本中的RF 、M 蛋白、嗜異性抗體會干擾基質(zhì)金屬蛋白酶3 （MMP-3）的檢測；RF會干擾Cys C的檢測，使結(jié)果異常升高。在免疫透射比濁法試劑中，一般在試劑2中含有包被檢測抗體的膠乳顆粒，嗜異性抗體可結(jié)合該檢測抗體，發(fā)生聚集反應，使?jié)岫壬?，對檢測造成正干擾。 2.M蛋白對生化檢測結(jié)果的影響 M蛋白是由漿細胞或B淋巴細胞單克隆惡性增殖產(chǎn)生的一種異常免疫球蛋白。M蛋白可在特定條件下形成沉淀，干擾分光光度比色法、比濁法和免疫學檢測方法。M蛋白可對血糖、γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶、總膽紅素、高密度脂蛋白膽固醇、CRP、免疫球蛋白等項目以及凝血功能實驗、藥物檢測等產(chǎn)生明顯干擾。與免疫散射比濁法比較，免疫透射比濁法受M蛋白干擾更明顯，其原因可能是免疫散射比濁法在檢測前先對樣本進行預稀釋，降低了M蛋白的干擾。 3.待測物濃度過高對生化檢測結(jié)果的影響 當待測物濃度過高時，免疫散射比濁法和免疫透射比濁法均可能出現(xiàn)檢測結(jié)果假性減低，其主要原因是產(chǎn)生了鉤狀效應。研究顯示，RF、心型脂肪酸結(jié)合蛋白、高敏C反應蛋白及CRP的臨床可見最高值可超出參考區(qū)間上限的100倍，β2-微球蛋白、RF、視黃醇結(jié)合蛋白、脂蛋白（a）濃度常超出分析測量范圍上限，這些項目具有較高的發(fā)生鉤狀效應的風險，需引起關注。尿微量白蛋白（mAlb）濃度也經(jīng)常超出分析測量上限，也應引起注意。樣本性狀、內(nèi)源性干擾、鉤狀效應等各種干擾因素是影響檢測結(jié)果準確性的重要因素。 除飲食、運動、溶血等因素外，藥物也是較為常見的一種影響檢驗結(jié)果的因素。一些臨床常見的藥物可通過影響機體內(nèi)氧化還原反應導致生化指標檢測結(jié)果出現(xiàn)異常。 1.鹽酸利多卡因 研究顯示，患者在靜脈滴注鹽酸利多卡因后血清出現(xiàn)干片法肌酐結(jié)果明顯高于酶法肌酐結(jié)果的情況。利多卡因通過血管給藥后能迅速到達全身，其中10%以原體藥物隨尿排出，90%經(jīng)肝臟細胞色素P450系統(tǒng)代謝為單乙基甘氨酰二甲基苯胺（MEGX）、甘氨酰二甲基苯胺和2 ，6-二甲基苯胺等產(chǎn)物，其中MEGX在代謝過程中會產(chǎn)生肌氨酸（N-甲基甘氨酸）類似物N-乙酰甘氨酸（NEG），可能會參與肌氨酸的氧化反應，生成過氧化氫，造成肌酐檢測結(jié)果的假性升高。 2.羥苯磺酸鈣 微血管保護劑羥苯磺酸鈣對基于Trinder反應的8種酶法檢測肌酐均可產(chǎn)生明顯的負干擾，其原因主要與羥苯磺酸鈣的還原性有關，羥苯磺酸鈣消耗了肌氨酸氧化酶法反應過程中參與Trinder反應的過氧化氫，抑制了生色酚的氧化顯色，使肌酐檢測結(jié)果偏低。 3.腎上腺素 腎上腺素通過自身的氧化還原反應對肌酐、尿酸產(chǎn)生負干擾。 4.還原性藥物 維生素C、多巴胺、多巴酚丁胺、去甲腎上腺素等還原性較強的藥物會消耗尿酸和肌酐檢測體系中產(chǎn)生的過氧化氫，對尿酸和肌酐檢測產(chǎn)生負干擾。采用雙試劑法，在試劑1中加入抗維生素C氧化酶，可消除維生素C的干擾。 5.青霉素 有研究結(jié)果顯示，當大劑量靜脈注射青霉素的患者尿液中青霉素>40 000 U/mL時，干化學法測定尿蛋白會出現(xiàn)假陰性，而磺基水楊酸法會出現(xiàn)假陽性。出現(xiàn)此現(xiàn)象的主要原因是由于2種檢測方法的反應原理不同。青霉素是一種有機弱酸，進入機體后，可以釋放H+，改變機體環(huán)境的pH值，當用干化學法檢測尿蛋白時，酸堿指示劑產(chǎn)生陰離子與帶陽離子的蛋白質(zhì)結(jié)合生成復合物，但青霉素降低了尿液的pH值，沒有達到酸堿指示劑的緩沖范圍，無法引起試紙條的指示劑顏色變化，導致檢測結(jié)果為假陰性。而使用磺基水楊酸法測定尿蛋白時，外界環(huán)境的pH值低于等電點，因此尿液中蛋白質(zhì)與磺基水楊酸更易發(fā)生反應，增加沉淀物的析出；青霉素本身具有與蛋白質(zhì)分子結(jié)構中的肽鍵類似的基團，可與磺基水楊酸結(jié)合，產(chǎn)生沉淀。上述2種因素增加了沉淀物的析出，使磺基水楊酸法檢測結(jié)果為假陽性或陽性程度高于干化學法。 6.頭孢替安 有些藥物會產(chǎn)生與分析物相似的顯色反應，從而影響檢驗結(jié)果。有研究結(jié)果顯示，頭孢替安會干擾干化學法測定總膽紅素水平，導致檢測結(jié)果升高。這是由于頭孢替安的結(jié)構與膽紅素相似，與總膽紅素檢測干片產(chǎn)生紅色的顏色反應，導致出現(xiàn)假陽性的檢測結(jié)果。 除了目前已知的影響檢測的藥物，臨床上也常常會出現(xiàn)一些未知藥物的干擾，這給一線的檢驗工作人員帶來了巨大的挑戰(zhàn)，如何識別出異常的檢驗報告成為檢驗科工作的難點。 臨床生化檢驗是一項常規(guī)但非常重要的臨床診斷方法，不僅能準確反饋患者當時的情況，還能更加精準地對病情狀況進行判斷，從而為臨床下一步治療方案的制定提供可靠的依據(jù)。 在審核臨床檢驗報告時應著重注意“多次結(jié)果比較”及“項目間的邏輯關系”。掌握臨床檢驗項目的常見影響因素，考慮臨床意義接近的不同項目之間的邏輯關系，注重多次檢驗結(jié)果的比較，采用不同的檢測方法進行復檢，與臨床溝通并結(jié)合患者病史綜合分析及判斷，可以及時發(fā)現(xiàn)存在差錯的檢驗報告。
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